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1.什么是蛋白質(zhì)組學
蛋白質(zhì)組學(proteomics)是采用大規(guī)模、高通量、系統(tǒng)化的方法,從整體的角度分析生物中動態(tài)變化的蛋白質(zhì)組成成分、表達水平和修飾狀態(tài)及蛋白質(zhì)之間相互作用的學科。
2.Olink產(chǎn)品檢測項目
3.Olink蛋白檢測所適用樣本
4.Olink蛋白研究方向
Olink蛋白質(zhì)組學常應用在Develop diagnostics biomarkers(診斷研發(fā))、Biomarker Discovery in Drug (藥物研發(fā))Development Process、Improve understanding of disease biology(基礎研究)、New applications (新的應用開發(fā)),重大疾病的研究(七大疾病類型和七大生理過程)、醫(yī)學轉(zhuǎn)化等等。
示例3.1:
2023年10月4日,Nature《目然》雜志上發(fā)布了三篇重磅文章集中報道了全球最大血漿蛋白質(zhì)組英目(UK Biobank Pharma Proteomics Project,UKB-PPP)的首批成果,揭開了大規(guī)模血漿蛋白質(zhì)組在精準醫(yī)學領(lǐng)域廣泛應用的新篇章。
這篇發(fā)表于Nature雜志的重量級研究均使用了UKB-PPP產(chǎn)生的數(shù)據(jù),其中13家國際生物制藥公司通過訪問英國生物庫生成了新的蛋白質(zhì)組學數(shù)據(jù)。UKB-PPP項目是一個大型綜合性項目,致力于推動藥物靶點發(fā)現(xiàn)和生物標志物開發(fā),旨在利用基因蛋白組學知識來更好地理解人類疾病機制,并促進新型治療方法研究及轉(zhuǎn)化,從而實現(xiàn)更加精準和靶向的治療
UKB-PPP項目從2020年11月開始至2021年3月,在英國樣本庫現(xiàn)有的502,414個樣本中選擇了54,219個樣本納入研究。其中,46,595個隨機選擇的自然人群隊列作為基線樣本,6,376個由13家藥企挑選的樣本作為專病隊列樣本,其中每家藥企挑選了約500個樣本。此外,研究中還包括了1,268位新冠患者3次隨訪樣本。所有EDTA血漿樣本分7個批次送至位于瑞典烏普薩拉的Olink總部實驗室進行Olink Explore 3072檢測,數(shù)據(jù)在2022年11月全部交付。截止目前,全部數(shù)據(jù)已可以向UK Biobank申請下載,供全球科學家進行科研使用。
研究團隊在拿到數(shù)據(jù)后進行了嚴格的內(nèi)部數(shù)據(jù)質(zhì)控及交叉驗證,確認了Olink Explore數(shù)據(jù)的高質(zhì)量和可靠性,并將血漿蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)與聯(lián)盟已有的大規(guī)模人群基因組和表型組數(shù)據(jù)結(jié)合。在文章中,研究人員提供了研究計劃的詳細總結(jié),包括技術(shù)和生物學驗證,對蛋白質(zhì)組疾病特性的見解,以及不同人群健康指標的預測模型。基于2,923種蛋白標志物的基因蛋白組學分析,文中發(fā)現(xiàn)并展示了非歐洲個體的祖先特異性蛋白質(zhì)定量性狀位點(protein Quantitative Trait Locus, pQTL)系統(tǒng)譜圖:發(fā)現(xiàn)14,287個pQTL主要遺傳關(guān)聯(lián),且81%是之前未被描述的;其中約83%蛋白標志物至少對應一個pQTL遺傳關(guān)聯(lián),且67% pQTL為與藥物靶點發(fā)現(xiàn)更相關(guān)的cis-pQTL;發(fā)現(xiàn)860個trans-pQTL,進一步揭示生物學通路與蛋白互作之間的關(guān)聯(lián)。????該研究提供了血漿蛋白質(zhì)組遺傳結(jié)構(gòu)的最新特征,而隨著樣本量和蛋白質(zhì)組覆蓋率的增加,新型pQTL的發(fā)現(xiàn)率也不斷增加。UKB-PPP及聯(lián)盟為科學界提供了相當廣泛和深入的開放性蛋白質(zhì)組學資源獲取渠道,并通過蛋白基因組學研究闡明生物學機制,加速生物標志物、疾病預測模型和治療方法的發(fā)展。
示例3.2:
進行性纖維化性間質(zhì)性肺病的蛋白組特征——多中心隊列研究
摘要:進行性纖維化間質(zhì)性肺病涵蓋一系列,其特征是呼吸衰竭加速、疾病頻繁惡化和早期死亡。目前沒有能夠在纖維化進展發(fā)生之前鑒別出風險較高的患者的方法。這項研究使用Olink Explore-384 Inflammation對588個進行性纖維化性間質(zhì)性肺病患者血漿樣本進行檢測,通過機器學習共鑒定到17個標志物,在預測纖維化性間質(zhì)性肺病患者風險方面具有巨大的潛力,且不同肺纖維化亞型中均顯示出高度一致性。
結(jié)果:0link蛋白組在發(fā)現(xiàn)集中共篩選到31個與肺纖維化進展相關(guān)的血漿蛋白質(zhì),其中17個蛋白質(zhì)在驗證集中被進一步驗證。根據(jù)基線肺功能臨床試驗排除標準控制入組,發(fā)現(xiàn)集保留270例樣本,驗證集保留119例樣本。Olink血漿蛋白組結(jié)合機器學習(LASSO篩選最終得到由12個蛋白質(zhì)組成的肺纖維化蛋白質(zhì)組學風險評估模型,定義評分小于0.3的為低風險人群,大于等于0.3的為高風險人群。和低風險人群相比,高風險人群1年內(nèi)最大肺活量變化明顯。
5.Olink蛋白技術(shù)優(yōu)點
①高通量(48-3072個蛋白)
②高靈敏度 高特異性(PEA雙抗體識別技術(shù))
③動態(tài)范圍廣(蛋白覆蓋10 logs fg-mg)
④樣本用量少(只需6μl可以檢測3072個蛋白)
5.Proximity Extension Assay (PEA)技術(shù)
PEA的技術(shù)又叫鄰近延伸分析技術(shù),是一種雙重識別免疫分析,即兩個匹配的抗體同時與一個靶標結(jié)合,并以獨特的DNA寡核苷酸標記。
Olink專利的PEA技術(shù),在檢測每一個抗原(蛋白)時,都設計了一對特異性匹配的抗體,保障了“免疫學反應水平的特異性”;更進一步的是,PEA技術(shù)借助于給這一對抗體上分別加上一一配對的核酸單鏈,從而借助DNA配對的特異性,規(guī)避了多重檢測時的“免疫學水平的串擾”。
PEA是一種非常適合于大規(guī)模的精準蛋白質(zhì)組學研究工具,具有良好的靈敏度、快捷性、高通量分析、以及在多重通道水平上的特異性。
溶液中的蛋白質(zhì)使兩種抗體接近,使其DNA寡核苷酸雜交,作為DNA聚合酶依賴性延伸步驟的模板。這將創(chuàng)建一個雙鏈DNA"條形碼",該條形碼對于特異性抗原來說是唯一的,并且在數(shù)量上與靶蛋白的初始濃度成正比。雜交和延伸后立即進行PCR擴增 ,最后通過微流控qPCR對擴增子進行定量。
6. Signature Q100 工作流程
olink蛋白項目實驗流程及實驗設計
Olink 實驗流程
(1)孵育
(2)延伸
(3)檢測
NGS檢測平臺所需儀器設備
Olink 實驗設計及注意事項:
7.link蛋白項目生信分析流程
Olink Proteomics創(chuàng)立于瑞典烏普薩拉,致力于突破蛋白檢測在“多重能力/特異性”、“靈敏度”和“檢測通量”等方面的綜合瓶頸,進而實現(xiàn)超靈敏多重蛋白標志物檢測、無偏靶向蛋白質(zhì)組學和精準蛋白組學,以幫助蛋白標志物的發(fā)現(xiàn)、藥物研發(fā)、轉(zhuǎn)化醫(yī)學、以及讓“多組學整合”真正切實可行。
具體來說,我們基于專利PEA技術(shù),秉承嚴謹和透明的科學精神,開發(fā)并充分驗證了一系列開創(chuàng)性的olink Panela
這些Panel可賦能科學家,通過在1-6μl體液中精確檢測15-5400種生物標志物,更加充分地理解實時生物學。從而,借助多組學發(fā)現(xiàn)PQTL等創(chuàng)新藥物靶點:篩選更好的疾病預測和預后標志物;理解藥物作用的MoAa,Safety, PK.PD.Dose:拓展已上市藥物的適應癥;開發(fā)伴隨診斷;加速藥物研發(fā)進程,降低藥物研發(fā)成本:同時促進從臨床科研到臨床應用的轉(zhuǎn)化;提高腫瘤等疾病早篩方法的靈敏度和特異性,并最終達致精準醫(yī)學。
Olink現(xiàn)已覆蓋100%主要信號通路,實現(xiàn)生物學意義上的超靈敏無偏靶向蛋白組學(兼容各種樣本類型,對傳統(tǒng)方法無法勝任的血漿血清等體液樣本尤其適用)。
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